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作者：沈奇;虞凌雪;高飞;刘长龙;周艳君;李国新;童光志;李丽薇;姜一峰;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：SP1作为MHCⅡ类分子反式激活因子CⅡTA的关键上游转录调控因子，在抗原递呈细胞的分化成熟和功能实现过程中发挥着至关重要的作用。本研究建立了一种高效检测猪源转录因子SP1的方法，提取猪骨髓细胞的RNA反转录成cDNA，以其为模板克隆到SP1的片段并连接到Pcaggs载体上，得到重组质粒Pcaggs-SP1。测得质粒浓度并根据公式计算拷贝数，稀释成10~1～10~8 copies/μL的标准品质粒，从而建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。试验结果表明：该方法在10~1～10~8 copies/μL范围内呈现出良好的线性关系；与常规PCR 相比，敏感性提高了1000倍；该方法仅能够检测到猪源细胞中的SP1基因，与其他物种细胞无交叉反应；组内和组间变异系数均小于1%，重复性好。利用该方法对PRRSV接毒的PAM细胞样品进行检测，结果显示SP1转录水平被下调。本研究建立的猪源转录因子SP1 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，可用于猪源SP1基因的定量检测，为进一步研究猪病病原微生物在感染过程中的免疫逃逸机制提供了准确有效的工具。
关键词：猪源SP1;;荧光定量PCR;;SYBR GreenⅠ
基金资助：国家自然科学基金(32072875);; 财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系资助
