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作者：周雪;高磊;张瑾宬;袁思凌;操蓉;刘丽娜;
单位：贵州医科大学基础医学院生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心;贵州医科大学生物与医学工程重点实验室;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室;
摘要：为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞293T后，Western blot检测重组蛋白RBD的表达；以表达RBD的重组质粒为模板，PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板，之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA，添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化，纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中，利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示，编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白，体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译，表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应，具有免疫反应原性，为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。
关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2;;刺突蛋白;;受体结合结构域;;体外转录;;真核表达
基金资助：贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2020]4Y217);; 国家级大学生创新创业训练计划项目(202110660008);; 贵州省大学生创新创业训练计划项目(S202010660060)
