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作者：范学伟;张西臣;张楠;姜鑫;
单位：吉林大学动物医学学院;黑龙江农业经济职业学院;
摘要：为了对弓形虫致密颗粒蛋白GRA23进行毕赤酵母真核系统表达，试验首先提取弓形虫的总RNA,反转录为cDNA;以cDNA为模板扩增GRA23基因，将其与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接构建重组质粒pPIC9K-GRA23,将其线性化后转化至GS115感受态细胞；然后采用PCR方法筛选阳性转化子，利用遗传霉素(G418)筛选高拷贝酵母重组菌株，经1%甲醇诱导表达后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定。结果表明：PCR扩增得到大小为657 bp的GRA23基因，重组质粒pPIC9K-GRA23经双酶切得到9 300 bp大小的pPIC9K载体条带和GRA23目的基因条带。重组菌株经甲醇诱导120 h后，得到目的条带大小为30 ku的GRA23蛋白，符合预期，且制备的蛋白可被His单克隆抗体特异性识别。说明弓形虫GRA23基因在毕赤酵母系统成功表达。
关键词：刚地弓形虫;;GRA23基因;;pPIC9K;;毕赤酵母;;表型鉴定;;真核表达
基金资助：黑龙江省自然科学基金资助项目(SS2022C005)
