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作者：隋泽;迟志端;朱莉仙;Zafar Ahmed;孟克巴依尔;其其格;艾尔青萨仁高娃;范瑞文;
单位：山西农业大学动物医学学院;阿拉善盟畜牧兽医技术推广中心;
摘要：为了制备S100A4纳米抗体及为S100A4蛋白在蒙古牛脂肪组织中表达的检测提供有利工具，试验利用已构建的羊驼源非免疫文库，以S100A4蛋白为抗原进行淘筛，经间接ELISA进行鉴定并经测序后获得S100A4纳米抗体序列；构建pColdⅠ-S100A4原核表达质粒并诱导表达，优化异丙基-β-D-硫代牛乳糖苷(IPTG)的诱导浓度，采用最优的诱导浓度选取其中1株阳性单克隆菌株原核表达重组质粒诱导表达，经镍柱和Superdex~(TM) 75纯化后作为一抗通过免疫组织化学法和Western-blot检测S100A4蛋白在蒙古牛脂肪组织中的表达。结果表明：经原核表达、纯化后获得分子量约为15 ku的S100A4纳米抗体。将该抗体应用到免疫组织化学法的检测中，在蒙古牛脂肪组织的细胞核和细胞质中发现经DAB染色和苏木素复染后呈棕黄色背景的S100A4阳性免疫信号；将该抗体应用到Western-blot的检测中发现S100A4纳米抗体能够与蒙古牛脂肪组织中的S100A4有效结合。说明本试验成功制备S100A4纳米抗体，其可在免疫组织化学和Western-blot检测中作为一抗分析S100A4在蒙古牛脂肪组织中分布及表达水平。
关键词：纳米抗体;;S100A4;;蒙古牛;;脂肪组织;;非免疫文库;;噬菌体展示
基金资助：内蒙古自治区“揭榜挂帅”项目(2022JBGS0023)
