来源：期刊VIP网 时间：
作者：王文涛;张思佳;何鑫淼;陈诗怡;吴赛辉;张冬杰;陈瑶生;丛佩清;亓美玉;田明;刘娣;何祖勇;
单位：黑龙江省农业科学院畜牧研究所;中山大学生命科学学院;
摘要：生长激素释放激素受体（GHRHR）表达于垂体细胞表面，调节垂体生长激素合成与分泌，对动物生长发育发挥重要调控作用。为深入了解GHRHR对五指山猪生长发育的影响，通过CRISPR-ctRNP体外酶切试验，筛选出切割效率达27.3%的1条gRNA用于构建CRISPR/Cas9表达载体。转染五指山猪肾细胞后，经流式分选富集到编辑效率高达100%的细胞群体作为供体细胞，进行体细胞核移植；再将250枚克隆胚胎转移至5头代孕母猪输卵管中，最终1头代孕母猪成功妊娠，分娩3头克隆仔猪均为GHRHR双等位基因编辑个体；编辑均导致GHRHR基因产生移码突变，可导致蛋白翻译提前终止，丧失生物学功能。最终仅有1头GHRHR编辑五指山猪存活，该个体60日龄时，体质量较野生型个体平均体质量下降23.4%。研究结果在五指山猪中实现GHRHR基因高效编辑，为培养微型宠物猪及解析GHRHR的调控功能提供理论依据。
关键词：五指山猪;;生长激素释放激素受体;;基因编辑猪;;CRISPR/Cas9
基金资助：国家科技创新2030-农业生物育种重大项目(2023ZD0404706);; 国家生猪产业技术体系项目(CARS-35)
