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作者：沈思思;江波涛;刘雪松;冯万宇;兰世捷;张蕾;苗艳;李丹;张国华;王欢;王岩;陈亮;
单位：黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院;
摘要：为建立可同时检测牛支原体（Mycoplasma bovis,MB）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica,MH）和多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,PM）的三重PCR检测方法，试验采用上述3种病原体对应的copD/F(MB)、lktc(MH)、kmt(PM)基因设计特异性引物。通过筛选退火温度和引物质量浓度，验证方法特异性、敏感性和重复性，建立可同时检测MB、MH和PM的三重PCR检测方法，并初步应用于临床。结果表明：该方法特异性强，仅对MB、MH和PM有特异性扩增，方法最适退火温度为52.5℃，最适引物质量浓度为1.0 mg·L~(-1)；对3种病原体最低检出限MB为1.75×10~3拷贝数·μL~(-1)、MH为1.34×10~4拷贝数·μL~(-1)、PM为1.96×10~4拷贝数·μL~(-1)，利用该三重PCR和单项PCR分别检测黑龙江省268份临床样本，显示三重PCR阳性检出率MB为28.73%(77/268)、MH为13.43%(36/268)、PM为20.52%(55/268)。混合感染以MB和PM为主，感染率为8.96%(24/268)；其次为MB和MH，感染率为6.72%(18/268);MH和PM感染率为3.36%(9/268)；同时感染3种病原体的感染率为1.12%(3/268)。三重PCR扩增结果与单项PCR检测结果总符合率为92.84%。说明建立的三重PCR可为MB、MH和PM临床快速检测及流行病学调查提供技术支持。
关键词：牛;;牛支原体;;溶血性曼氏杆菌;;多杀性巴氏杆菌;;三重PCR
基金资助：黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院2022年自拟项目(ZNKT-202213,ZNKT-2022-ZD03);; 齐齐哈尔市科技计划创新激励项目(CNYGG-2024019)
