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作者：李娜娜;王鸿;田鹏;文继秀;杨丹;吴霞;兰远波;
单位：遵义医科大学附属医院结核病区;贵州医科大学免疫教研室;遵义市第一人民医院呼吸与危重症医学科;
摘要：目的：探讨Rv2048c基因敲除对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）药物敏感性的影响。方法：本研究以MTB标准菌株（H37Rv-WT）为模版，基于同源重组原理构建Rv2048c基因敲除株（H37RvΔRv2048c）。通过固体培养、抗酸染色、扫描电镜观察菌落形态、菌体大小、细胞壁完整性；绘制生长曲线评估生长速度；采用微孔板法药物敏感性试验测定最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）；利用溴化乙锭染色法检测细胞壁通透性。比较H37Rv-WT与H37RvΔRv2048c在生物学特性、抗结核药物敏感性及细胞壁通透性方面的差异，进而分析Rv2048c基因对MTB药物敏感性的作用及其潜在机制。结果：成功构建了H37RvΔRv2048c；菌落形态由H37Rv-WT的粗糙型（R型）转变为H37RvΔRv2048c的光滑型（S型）；两种菌体均呈棒状结构，细胞壁基本一致，H37RvΔRv2048c菌体长度变短；乙硫异烟胺（ethionamide,Eto）对H37RvΔRv2048c的MIC(1.25μg/ml)为Eto对H37Rv-WT的MIC(5.00μg/ml)的1/4；阿米卡星（amikacin,Am）对H37RvΔRv2048c的MIC(0.25μg/ml)为Am对H37Rv-WT的MIC(1.00μg/ml)的1/4；溴化乙锭染色后H37RvΔRv2048c的荧光强度（1.526RFU）较H37Rv-WT(0.924RFU)显著增高（t=16.960,P<0.001）。结论：Rv2048c基因的缺失可降低Eto和Am的MIC，该基因可能通过调控MTB细胞壁通透性影响MTB对Eto和Am的敏感性，为理解MTB耐药机制提供了新视角，并为增强Eto与Am疗效的研究提供了潜在靶点。
关键词：分枝杆菌,结核;;基因敲除;;微生物敏感性试验;;研究
基金资助：贵州省科技厅基础研究计划(黔科合基础-ZK[2022]一般648);; 贵州省卫生健康委科学技术基金(gzwkj2024-106;gzwkj2021-101);; 国家自然科学基金(81860004)~~
