来源：期刊VIP网 时间：
作者：尚靖;路畅;侯阳波;袁沁;李炜;王海静;陈进宝;
单位：上海中医药大学附属普陀医院中医肿瘤科;上海中医药大学附属普陀医院放射科;上海中医药大学附属普陀医院普外科;上海中医药大学附属普陀医院神经内科;上海中医药大学附属普陀医院药学部;
摘要：目的 探讨高转移性结直肠癌细胞HCT116诱导M2型巨噬细胞极化对结直肠癌免疫逃逸的影响及其机制。方法 将结直肠癌细胞条件培养基(CM)与佛波酯(PMA)诱导的M0型巨噬细胞共培养后，通过流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)观察M2型巨噬细胞极化状态；将CM_(M0)、CM_(SW480-Mφ)和CM_(HCT116-Mφ)与HCT116细胞共培养后，通过Western blot和qPCR检测程序性死亡受体配体1(PD-L1)的表达情况，同时将刺激后的HCT116细胞与人源T淋巴细胞共培养，检测HCT116细胞存活情况及上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平；用Western blot、qPCR和ELISA检测SW480和HCT116细胞中Kruüppel样因子4(KLF4)表达差异；用KFL4抑制剂肯帕罗酮(Ken)预处理HCT116细胞后，将CM_(HCT116-Mφ)和CM_((HCT116+Ken)-Mφ)与M0型巨噬细胞共培养，通过流式细胞术、qPCR、ELISA实验观察M2型巨噬细胞极化状态。将CM_(HCT116-Mφ)和CM_((HCT116+Ken)-Mφ)与HCT116细胞共培养后，通过Western blot和qPCR检测PD-L1的表达情况。结果 M0型巨噬细胞在CM刺激后，HCT116-Mφ细胞中CD11b~+CD206~+细胞比例更高，M2型巨噬细胞标志物白细胞介素(IL)-10及转化生长因子-β(TGF-β)表达更高；相比于CM_(SW480-Mφ)组，CM_(HCT116-Mφ)组的PD-L1蛋白表达水平更高；与T淋巴细胞共培养后，CM_(HCT116-Mφ)组细胞存活最多，同时TNF-α和IFN-γ水平最低；加入Ken后，M2型巨噬细胞极化比例及标志物均降低。与CM_(HCT116-Mφ)组相比，CM_((HCT116+Ken)-Mφ)组HCT116细胞PD-L1表达下降。结论 高转移性结直肠癌细胞通过分泌KLF4诱导M2型巨噬细胞极化促进结直肠癌细胞PD-L1表达，促进肿瘤免疫逃逸。该研究有望为提高临床免疫治疗效果提供潜在靶点。
关键词：高转移性结直肠癌细胞;;KLF4;;肿瘤相关巨噬细胞;;免疫逃逸;;PD-L1
基金资助：上海市启明星基金(扬帆专项)(编号：22YF1441400);; 上海市普陀区卫生健康系统科技创新项目(编号：ptkwws202409);; 上海市第六人民医院联合共建科学研究基金(编号：23-LY-03);; 上海中医药大学附属普陀医院百人计划(编号：2022-RCLH-03);; 上海中医药大学预算内项目(编号：2021LK055);; 上海市卫生健康系统重点学科计划(编号：2024ZDXK0046)~~
