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作者：王安琪;张慧茹;周园园;刘崇;陈义昭;涂佳杰;
单位：安徽医科大学药学科学学院;
摘要：目的 采用CRISPR/Cas 9技术构建微小RNA-22-3p(miR-22)基因敲除(miR-22~(-/-))小鼠，繁育miR-22~(-/-)小鼠并鉴定其基因型。方法 使用CRISPR/Cas 9技术，构建miR-22~(-/-)基因工程小鼠，基因鉴定F0代miR-22~(-/-)小鼠后，待其性成熟后与同窝野生型小鼠交配得F1代miR-22~(-/-)小鼠，通过实时荧光定量聚合酶联反应(qPCR)从RNA水平上分析miR-22敲除效率。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-22与靶基因的相互作用。结果 利用CRISPR/Cas 9技术成功构建了miR-22~(-/-)小鼠，对繁育获得的小鼠进行了基因鉴定，鉴定出了miR-22~(+/+)、miR-22~(+/-)、miR-22~(-/-)三种稳定的基因型。qPCR检测结果证实miR-22~(-/-)小鼠与同窝野生型小鼠比较，心、肝、肺、肾、脾、胸腺六种组织中几乎不表达miR-22。Western blot检测出miR-22~(-/-)小鼠组织中的NLRP3蛋白的相对表达量低于野生型小鼠。结论 成功构建了miR-22~(-/-)小鼠模型，并得到稳定遗传的纯合miR-22~(-/-)小鼠。miR-22对下游靶基因NLRP3有抑制作用。
关键词：miR-22;;CRISPR/Cas 9;;基因敲除;;聚合酶链式反应;;琼脂糖凝胶电泳;;基因型鉴定;;NLRP3
基金资助：安徽省高校杰出青年科研项目(编号：2022AH020052)~~
