来源：期刊VIP网 时间：
作者：王琪;侯子文;刘瑶瑶;魏丹;孔庆杰;陈霞;
单位：天津中医药大学第一附属医院针灸科;国家中医针灸临床医学研究中心;天津中医药大学针灸推拿学院;成都市新都区中医医院针灸科;
摘要：目的：基于p53蛋白（p53）/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠的神经保护作用及作用机制。方法：从102只雄性Wistar大鼠中随机选取20只作为假手术组，其余大鼠采用改良的颈外动脉进线栓法制备右侧大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，剔除造模不成功和死亡大鼠各1只，将剩余大鼠随机分为模型组、激动剂组、针刺组及针刺+激动剂组，每组20只。针刺组及针刺+激动剂组予醒脑开窍针刺法干预，穴取“水沟”、双侧“内关”、患侧“三阴交”，患侧“内关”“三阴交”连接电针，疏密波，频率2 Hz/15 Hz，电流1 mA，每日2次，每次20 min，连续7 d；激动剂组和针刺+激动剂组予腹腔注射p53激动剂COTI-2(15 mg/kg)，每日1次，连续7 d。采用Zausinger六分法评估大鼠神经功能缺损程度；TTC染色法检测大鼠脑梗死体积百分比；HE染色法观察大鼠缺血侧脑组织形态；普鲁士蓝染色法检测大鼠缺血侧脑组织铁沉积量；透射电镜观察大鼠缺血侧皮质线粒体结构；比色法检测大鼠血清铁（Fe~(2+)）含量，硫代巴比妥酸法检测大鼠缺血侧海马丙二醛（MDA）含量，微板法检测大鼠缺血侧海马谷胱甘肽（GSH）含量；流式细胞术检测大鼠缺血侧皮质活性氧（ROS）平均荧光强度；实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠缺血侧海马GPX4、SLC7A11、p53 mRNA和蛋白表达。结果：与假手术组比较，模型组神经功能缺损评分降低（P<0.01）；脑梗死体积百分比升高（P<0.01）；脑组织出现大片细胞坏死，细胞核固缩深染，空泡样改变；缺血侧皮质及海马铁沉积百分比增加（P<0.01）；线粒体膜密度增加，线粒体嵴断裂或减少，外膜破裂；Fe~(2+)、MDA含量和ROS平均荧光强度升高（P<0.01）,GSH含量降低（P<0.01）;GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）,p53 mRNA和蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较，激动剂组神经功能缺损评分降低（P<0.05）；脑梗死体积百分比升高（P<0.01）；脑组织病理性损伤进一步加重；缺血侧皮质及海马铁沉积百分比增加（P<0.01）；线粒体数量减少，膜密度增加，线粒体嵴断裂或减少，外膜破裂；Fe~(2+)、MDA含量和ROS平均荧光强度升高（P<0.01,P<0.05）,GSH含量降低（P<0.05）;GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01,P<0.05）,p53 m RNA和蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较，针刺组及针刺+激动剂组神经功能缺损评分升高（P<0.01,P<0.05）；针刺组脑梗死体积百分比降低（P<0.01）；针刺组及针刺+激动剂组脑组织病理性损伤减轻；针刺组及针刺+激动剂组缺血侧皮质及海马铁沉积百分比减少（P<0.01）；针刺组及针刺+激动剂组线粒体结构相对清晰，线粒体嵴轻度断裂或减少；针刺组Fe~(2+)、MDA含量和ROS平均荧光强度降低（P<0.01）,GSH含量升高（P<0.01），针刺+激动剂组ROS平均荧光强度降低（P<0.01）；针刺组及针刺+激动剂组GPX4、SLC7A11 mRNA表达升高（P<0.01）,p53 mRNA表达降低（P<0.01,P<0.05），针刺组GPX4、SLC7A11蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,p53蛋白表达降低（P<0.01），针刺+激动剂组p53蛋白表达降低（P<0.05）。与激动剂组比较，针刺+激动剂组神经功能缺损评分升高（P<0.01）；脑梗死体积百分比降低（P<0.01）；脑组织病理性损伤减轻；缺血侧皮质及海马铁沉积百分比减少（P<0.01）；线粒体结构相对清晰，线粒体嵴轻度断裂或减少；Fe~(2+)、MDA含量和ROS平均荧光强度降低（P<0.01）,GSH含量升高（P<0.05）;GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达升高（P<0.01,P<0.05）,p53 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）。与针刺+激动剂组比较，针刺组神经功能缺损评分升高（P<0.05）；脑梗死体积百分比降低（P<0.05）；脑组织病理性损伤减轻；皮层及海马铁沉积百分比减少（P<0.01）；线粒体形态趋于正常；Fe~(2+)、MDA含量和ROS平均荧光强度降低（P<0.05）,GSH含量升高（P<0.01）;GPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白表达升高（P<0.01,P<0.05）,p53 mRNA和蛋白表达降低（P<0.P<0.05）。结论：醒脑开窍针刺法可减轻CIRI大鼠神经损伤，其机制可能为通过p53/SLC7A11/GPX4信号通路抑制神经细胞铁死亡。
关键词：脑缺血再灌注损伤;;醒脑开窍针刺法;;铁死亡;;p53/SLC7A11/GPX4信号通路
基金资助：国家自然科学基金青年项目:82104995
