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作者：周小仝;何丽英;廖郑悦;杨兴茂;李勇;白静;牛舒琪;刘思静;国锦琳;
单位：成都中医药大学药学院;西南特色中药资源国家重点实验室;成都中医药大学医学技术学院;
摘要：目的:基于免疫浸润特征，采用细胞实验与动物实验探讨冬虫夏草蛋白缓解狼疮性肾炎(Lupus nephritis, LN)的作用及机制。方法:从GEO数据库中获取LN患者肾脏组织数据集，采用R软件、Import和CIBERSORT数据库对肾脏中免疫细胞浸润情况进行分析，并通过随机森林法评估LN患者肾脏中的免疫浸润特征。提取冬虫夏草总蛋白并通过LC-MS/MS鉴定其组成；构建M1型巨噬细胞模型，通过实时荧光定量PCR和流式细胞术评价冬虫夏草蛋白对M1型巨噬细胞极化的影响；利用MRL/lpr小鼠建立LN模型，通过ELISA、HE染色、PAS染色、流式细胞术和免疫荧光等技术分析冬虫夏草总蛋白对LN小鼠肾脏及对肾脏M1型巨噬细胞极化的影响；通过Western blot法检测冬虫夏草总蛋白对M1型巨噬细胞p-p38、p38、p-ERK、ERK、p-JNK和JNK蛋白表达的影响。结果:免疫浸润分析结果表明，M1型巨噬细胞在LN患者肾脏中浸润增加，抑制肾脏M1型巨噬细胞的浸润可能是治疗LN的有效干预方案。LC-MS/MS从冬虫夏草蛋白中，共鉴定出422个非冗余蛋白。细胞实验结果表明，与模型对照组相比，冬虫夏草蛋白100、200、400μg/mL均可降低巨噬细胞中一氧化氮合酶(Inos)和白细胞介素1β(Ilb)的基因表达(P<0.01),抑制M1型巨噬细胞(F4/80~+CD86~+细胞)的极化(P<0.05)。动物实验结果表明，与模型对照组相比，冬虫夏草蛋白1.5 g/kg组小鼠尿蛋白含量显著降低(P<0.01),尿肌酐含量显著增加(P<0.01),血清中dsDNA抗体和血清ANA含量明显降低(P<0.05),HE和PAS染色的结果均表明冬虫夏草蛋白1.5 g/kg小鼠肾组织损伤减轻，LN小鼠肾脏M1型巨噬细胞的浸润减轻，p-p38和p-JNK蛋白表达下调(P<0.05)。结论:冬虫夏草总蛋白可能通过JNK/p38 MAPK信号通路抑制M1型巨噬细胞活化缓解狼疮性肾炎。
关键词：冬虫夏草;;蛋白;;狼疮性肾炎;;巨噬细胞;;极化;;c-JUN氨基末端激酶;;细胞外信号调节激酶;;p38蛋白激酶
基金资助：国家自然科学基金(编号：81872959、81373920);; 四川省科技厅自然科学基金(编号：2023NSFSC1757)
