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作者：钟冰莲;王一钦;江稳滔;陈静妃;陈炜聪;老膺荣;贺松其;
单位：南方医科大学中医药学院;广州中医药大学第二附属医院省部共建中医湿证国家重点实验室;
摘要：目的:研究茵陈五苓散对胆红素联合丙磺舒诱导的HepaRG黄疸细胞模型的影响，探讨其退黄作用机制。方法:将HepaRG细胞随机分为正常对照血清组、3.42、6.84、13.68 g/kg茵陈五苓散10%含药血清组、0.10 g/kg熊去氧胆酸10%含药血清组、6.84 g/kg茵陈五苓散含药血清+10μmol/L多索吗啡组、6.84 g/kg茵陈五苓散含药血清+0.095 mmol/L阿卡地新组，CCK-8法检测细胞活力；除正常对照血清组外，均采用胆红素联合丙磺舒构建HepaRG黄疸细胞模型，加入相应药物或含药血清，检测细胞内总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)含量和细胞外直接胆红素(DBIL)含量；检测细胞活性氧(ROS)、线粒体膜电位水平和三磷酸腺苷含量(ATP);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测腺苷活化蛋白激酶(Ampk)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(Pgc1α)/线粒体转录因子A(Tfam)通路相关靶点mRNA和蛋白表达。结果:与正常对照血清组相比，3.42、6.84、13.68 g/kg茵陈五苓散10%含药血清组及熊去氧胆酸10%含药血清组对细胞活力无明显影响(P>0.05);与正常对照血清组相比，模型对照组细胞TBIL、IBIL含量和ROS水平显著升高(P<0.01),Pgc1α、Tfam的mRNA表达显著下调(P<0.01),p-AMPK、PGC-1α、TFAM蛋白表达明显下调(P<0.05),线粒体膜电位和ATP含量显著降低(P<0.01);与模型对照组相比，3.42、6.84、13.68 g/kg茵陈五苓散10%含药血清组及熊去氧胆酸10%含药血清组细胞内TBIL、IBIL含量显著降低(P<0.01),细胞外DBIL含量显著升高(P<0.01),6.84 g/kg茵陈五苓散10%含药血清组Pgc1α和Tfam的mRNA表达显著上调(P<0.01),p-AMPK、PGC-1α、TFAM蛋白表达明显上调(P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.01),线粒体膜电位水平、ATP含量显著升高(P<0.01);与6.84 g/kg茵陈五苓散10%含药血清组相比，6.84 g/kg茵陈五苓散含药血清+10μmol/L多索吗啡组Pgc1α、Tfam的mRNA表达显著下调(P<0.01),p-AMPK、PGC-1α、TFAM蛋白表达明显下调(P<0.05),ROS水平显著升高(P<0.01),线粒体膜电位水平、ATP含量显著降低(P<0.01)。结论:茵陈五苓散通过激活AMPK/PGC-1α/TFAM通路，改善HepaRG黄疸细胞模型中线粒体膜电位，降低ROS水平，提高ATP含量，进而发挥退黄作用。
关键词：茵陈五苓散;;黄疸;;腺苷活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α/线粒体转录因子A通路;;线粒体膜电位;;活性氧;;三磷酸腺苷
基金资助：省部共建中医湿证国家重点实验室开放课题项目(编号：SZ2021KF14)
