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作者：赵帅军;程思远;万冉;程俞梦;单柏溪;赵鹏;李建生;
单位：河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心,河南省中医药防治呼吸病重点实验室;河南中医药大学第一附属医院;河南中医药大学第一临床医学院;河南中医药大学中医药科学院;
摘要：目的:基于网络药理学结合实验验证，探讨燥湿化痰泻肺方改善肺炎克雷伯菌诱导的重症肺炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获取燥湿化痰泻肺方活性成分及靶点，通过GeneCards、DisGeNET、OMIM数据库收集肺炎相关靶点，利用String数据库构建关键靶点PPI网络图。基于MetaScape数据库进行GO和KEGG分析，使用PDB和CB-Dock进行分子对接验证。建立肺炎克雷伯菌诱导的重症肺炎小鼠模型，给予燥湿化痰泻肺方灌胃，腹腔注射头孢曲松钠，第3 d处死小鼠。称小鼠体质量记录死亡率，计算小鼠湿干比；血常规检测小鼠外周血白细胞及中性粒细胞计数；HE染色观察肺组织病理变化；马松染色观察小鼠肺组织胶原纤维沉积情况；CT检测肺实变范围；ELISA法测定肺组织及肺泡灌洗液炎症因子含量；流式细胞术检测肺泡灌洗液中性粒细胞比例；免疫组化观察髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和淋巴细胞抗原6复合体位点G(Ly6G)蛋白阳性表达；实时荧光定量PCR法检测中性粒细胞趋化因子mRNA表达；Western blot法检测p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-STAT6/STAT6蛋白表达。结果:筛选出燥湿化痰泻肺方治疗肺炎的活性成分146个，关键蛋白391个。GO分析发现潜在靶点作用于细胞迁移的正调控、蛋白酪氨酸激酶活性、转录调节复合物等生物学过程；KEGG与肺炎相关的信号通路主要富集于JAK/STAT信号通路。动物实验验证结果表明，与正常对照组比较，模型对照组体质量显著降低，死亡率升高，小鼠肺组织肺泡壁增厚，肺泡结构破坏，肺泡及肺间质中伴有大量的炎细胞浸润，肺组织充血水肿，肺损伤及肺泡炎评分显著升高(P<0.01),肺实变范围、肺密度显著增加，胶原纤维沉积显著增加，肺组织及肺泡灌洗液IL-6、TNF-α含量明显升高，肺组织MPO、NE、Ly6G蛋白阳性表达升高，Cxcl2、Ccl9 mRNA表达明显上调，肺组织p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-STAT6/STAT6表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，燥湿化痰泻肺方9、18 g/kg组体质量显著升高，死亡率降低，肺泡结构恢复，炎细胞浸润减轻，肺损伤减轻，泡炎评分显著降低(P<0.01),肺实变范围及胶原纤维沉积减少，肺组织及肺泡灌洗液IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.05或P<0.01),肺泡灌洗液中性粒细胞百分率显著降低(P<0.01),肺组织MPO、NE、Ly6G蛋白阳性表达水平降低，Cxcl2、Ccl9 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01),肺组织p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-STAT6/STAT6表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:燥湿化痰泻肺方可以减少中性粒细胞浸润，抑制炎症反应，改善重症肺炎小鼠模型，其机制与抑制JAK/STAT信号通路有关。
关键词：燥湿化痰泻肺方;;重症肺炎;;网络药理学;;Janus激酶-信号转导及转录激活因子信号通路
基金资助：河南省高校科技创新人才支持计划(编号：24HASTIT073);; 河南省本科高校青年骨干教师培养计划(编号：2023GGJS084);; 河南省高等学校重点科研项目(编号：24A360013)
