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作者：苗姝雅;高洁;马洪旭;刘淼;阮元;麻兵继;
单位：河南农业大学农学院中药材系;
摘要：目的：克隆铁棍山药花青素合成酶基因，并初步研究其功能。方法：采用PCR、同源重组等分子生物学技术从铁棍山药根皮中克隆花青素合成酶基因DoANS;运用相关软件考察DoANS基因的分子特性；采用实时荧光定量PCR技术，研究DoANS在铁棍山药根茎锈斑形成期不同组织中的表达情况；通过转基因拟南芥对其进行初步功能验证。结果：怀山药花青素合成酶基因DoANS序列CDS长度为1 072 bp,编码356个氨基酸，相对分子质量为40 113.92 Da,与同属植物紫山药ANS氨基酸同源性达到96.65%,亲缘关系最近。另外，DoANS在铁棍山药不同部位均有表达，其中在有锈斑根茎表皮中表达量最高。通过观察发现，与野生型拟南芥植株相比，转DoANS拟南芥在株高、叶片长度、果荚长度、抽薹时的莲座叶数等四个指标均有提高。在寒冷胁迫下，T2代转基因拟南芥DoANS表达量呈现先升高、后降低、再升高、再降低的趋势，在第5个小时达到峰值。结论：DoANS基因可能在调控植物生长中发挥作用，且在寒冷胁迫下诱导表达，但对花青素的合成作用仍有待深入研究。
关键词：铁棍山药;;花青素合成酶基因DoANS;;功能验证;;寒冷胁迫
基金资助：国家自然科学基金项目(82473890);; 河南省自然科学基金项目(232300421127);; 豫药全产业链研发河南省协同创新中心开放课题(2024YYXT-KFKT-01)
