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作者：魏升;钟光辉;曹晓丹;张荣荣;毛青云;陈孟廉;
单位：浙江中医药大学附属宁波市中医院;宁波市海曙区段塘街道卫生服务中心;
摘要：目的：基于ERK2/TFEB通路探讨温阳消癥方调控肾小管上皮细胞自噬抑制肾间质纤维化的机制。方法：以大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E作为研究对象，用5 ng/mL TGF-β_1诱导NRK-52E造模。分组方案一：空白对照组、空白血清组、模型组、3-MA组、RAPA组、CQ组、温阳消癥方含药血清组、温阳消癥方含药血清+3-MA组。分组方案二：空白对照组、空白血清组、模型组、海藻糖组、温阳消癥方含药血清组、温阳消癥方含药血清+海藻糖组。实时荧光定量PCR法检测各组细胞中LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK2、TFEB mRNA表达；Western Blot法检测各组细胞中LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK2、TFEB蛋白表达；溶酶体荧光探针检测自噬现象；吖啶橙染色检测各组细胞溶酶体膜的通透性。结果：与模型组比较，温阳消癥方含药血清组细胞LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK2 mRNA和LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.05),溶酶体荧光和橙黄色荧光强度显著减弱。3-MA组、CQ组指标变化趋势与温阳消癥方相似，RAPA组、海藻糖组指标变化趋势与温阳消癥方相反。结论：温阳消癥方通过抑制ERK2/TFEB信号通路，显著降低LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK2、TFEB mRNA和蛋白表达，减弱溶酶体荧光强度和溶酶体膜通透性，从而抑制肾小管上皮细胞的异常自噬，减轻肾间质纤维化。
关键词：温阳消癥方;;肾间质纤维化;;肾小管上皮细胞自噬;;ERK2/TFEB信号通路
基金资助：国家自然科学基金项目(82205063);; 浙江省自然科学基金项目(HDMY24H270004);; 浙江省中医药科技计划项目(2021ZB251);; 宁波市科技计划项目(2022J284)
