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作者：康欣桐;隋泽;赵梓桥;乌日尼乐;张昆丽;范瑞文;张建峰;
单位：山西农业大学动物医学学院;广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省动物疫病野外科学观测研究站;
摘要：为了制备猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）N蛋白和抗N蛋白的单克隆抗体（m Ab），将PDCoV N基因克隆至p GEX-6p-1载体中，转化至BL21(DE3)感受态细胞，诱导纯化后获得可溶性重组N蛋白，约43k Da，大小符合预期。用重组N蛋白对小鼠进行免疫，采用细胞融合技术制备单克隆抗体，共获得5株（2D8、2E2、6A1、9C10、5H10）稳定分泌N蛋白抗体的杂交瘤细胞株。通过免疫印迹和间接免疫荧光试验（IFA）判定5株杂交瘤细胞株均能够特异性地识别N蛋白，其中2株（2D8、6A1）腹水抗体效价均高达1∶1 024 000。中和试验表明，2株单克隆抗体均具有病毒中和作用。结果表明，成功表达了N蛋白及制备了5株能稳定分泌与PDCoVN蛋白特异性结合的单克隆抗体，为PDCoVN蛋白的功能和PDCoV检测方法的研究提供了基础，对该疾病的临床诊断、流行病学调查与疫病防控具有重要意义。
关键词：猪德尔塔冠状病毒;;N蛋白;;原核表达;;单克隆抗体
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800801-02);; 广东省自然科学基金面上项目(2023A1515012153);; 山西省科技创新人才团队专项资助项目(202204051001022);; 猪禽种业全国重点实验室项目(2023QZ-NK05,GDNKY-ZQQZ-K07);; 科技创新战略专项资金(高水平农科院建设)-人才项目(R2023PY-QYB013)
