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作者：吕皓晴;刘颖;张粟子;刘立元;颜新敏;郝华芳;储岳峰;许健;袁律峰;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;新疆农业大学动物医学学院;
摘要：羊支原体肺炎是由多种支原体引起的一类疾病的总称，在我国报道的病原主要包括绵羊肺炎支原体（Mo）、山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）和丝状支原体山羊亚种（Mmc）等。为了建立一种能够快速鉴别Mo、Mccp、Mmc的方法，本研究通过基因组共线性分析，鉴定3种羊支原体基因组特异性区间，设计了3种羊支原体特异性引物共计87条，从中筛选出1套三重PCR检测引物，建立了Mo、Mccp、Mmc三重PCR检测方法，对该方法进行优化后，开展特异性、灵敏度试验以及临床样本检测。结果显示，利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法，能特异性扩增出3个目的条带：Mo(467 bp)、Mccp(668 bp)、Mmc(310 bp)，探索出最佳延伸时间和退火温度分别为10 s和56℃，与牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等其他病原无交叉反应；对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数分别为10~2copies/μL、10~1copies/μL和10~2copies/μL。结果表明，本研究建立的三重PCR方法可用于Mo、Mccp、Mmc感染的快速鉴别诊断及流行病学调查，具有临床便捷、诊断快速的特点。
关键词：羊支原体肺炎;;多重PCR;;绵羊肺炎支原体;;山羊支原体山羊肺炎亚种;;丝状支原体山羊亚种
基金资助：国家重点研发计划项目子课题(2022YFD180070202);; 中国农业科学院创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI);; 甘肃省科技重大专项(23ZDNA007)
