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作者：徐娜;张芷盈;杜星南;于黛辉;郑海学;陈霞;伍国强;
单位：兰州理工大学生命科学与工程学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;华南农业大学兽医学院;
摘要：为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值，以pET-32a（+）为原核表达载体，猪源CD69基因为目的基因，构建重组质粒pET-32a-CD69，针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达；通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后，将纯化的CD69蛋白与佐剂按1∶1的比例混合，多次免疫雄性BALB/c小鼠制备多克隆抗体，并用免疫印迹试验（Western-blot）与酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）进行鉴定。结果表明，重组的CD69以包涵体形式表达，分子质量约为35 k Da；通过ELISA测定鼠源多克隆抗体效价，结果显示效价达到1∶64 000以上；Western-blot结果表明，该多克隆抗体表现出良好的反应性和特异性。激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备，为今后我国猪产业的发展与猪相关疾病检测提供了帮助。
关键词：CD69基因;;原核表达;;蛋白纯化;;多克隆抗体
基金资助：国家自然科学基金项目(32202821);; 科技重大专项-国家重点实验室重组项目(22ZD6NA001);; 甘肃省联合科研基金重大项目(24JRRA806);; 国家生猪技术创新中心项目(NCTIP-XD/C03)
