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作者：张志伟;袁敬知;周红;范红结;蔺辉星;
单位：南京农业大学动物医学院;
摘要：为建立快速、灵敏的胞内劳森菌（LI）检测技术，笔者基于LI的16S rDNA基因序列设计特异性引物，构建重组质粒，并以其为模板优化反应条件，建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法，并检验方法的敏感性、特异性和重复性。结果显示，本方法的标准曲线方程为y=-3.414 3x+39.254(R~2=0.998 4)，在2×10~8～2×10~2 copies/μL质粒范围内呈现良好的线性关系。最低检测限为20 copies/μL，较常规PCR(2×10~2 copies/μL)灵敏度提升10倍。特异性强，不与猪伤寒沙门菌、大肠杆菌、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒及猪痢疾短螺旋体等7种常见肠道病原体发生交叉反应。重复性分析显示，批内变异系数为0.05%～0.42%，批间变异系数为0.81%～1.30%，均低于2%，表明方法稳定性良好。运用本方法对采自安徽、江苏省的526份猪肛拭子进行检测，阳性检出率为19%，高于常规PCR(16%)。其中安徽省阳性率为22.0%，江苏省为16.7%，所有受检猪场均呈阳性。进一步分析发现，保育猪的感染率为23.6%，明显高于育肥猪的11.5%；腹泻猪的阳性率为35.4%，高于非腹泻猪的17.4%。结果表明，本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具备高灵敏度、良好特异性和重复性，不仅为猪增生性肠病的快速诊断与流行病学研究提供了可靠的技术支持，同时临床数据对了解LI在我国猪群中的流行特征与传播机制研究具有一定的参考意义。
关键词：胞内劳森菌;;荧光定量PCR;;流行病学调查
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1800900);; 国家自然科学基金项目(31702278);; 大学生创新训练计划(SRT)项目(202417XX023);; 江苏高校优势学科建设工程专项资金项目(PAPD)
