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作者：朱新龙;王红梅;刘怡涵;赵珍萍;靳亚丽;魏衍全;
单位：甘肃农业大学动物医学院;
摘要：构建并表达猫杯状病毒（FCV）VP1及其截短体VP1-CDE，并评价其免疫原性。将目标基因克隆至pET28a-SUMO载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)后，经IPTG诱导尝试可溶性表达。SDS-PAGE结果显示，VP1蛋白与VP1-CDE蛋白分子质量分别约为60 k Da与15 k Da，与理论值相符；用6×His标签抗体进行Western-blot试验证实其正确性。重组蛋白经Ni~(2+)亲和层析纯化后，与弗氏佐剂等体积乳化后免疫BALB/c小鼠，采集血清进行间接ELISA，结果显示，VP1与VP1-CDE组均能诱导高滴度针对相应蛋白的特异性Ig G；在前3次免疫时，抗体水平随免疫次数增加而升高，第4次免疫后第14天测得抗体水平和第3次免疫后第14天的水平无显著差异，抗体水平达到平台期。病毒中和试验结果表明，三免后第14天VP1-CDE组中和抗体滴度达1∶223,VP1组为1∶178，二者水平相当。综上所述，VP1-CDE以较小分子质量实现与全长VP1相当的免疫原性，且表达中更易实现正确折叠、不易形成包涵体，可作为FCV亚单位疫苗的优选抗原，为后续疫苗研发提供了试验依据。
关键词：猫杯状病毒;;VP1蛋白;;VP1-CDE蛋白;;原核表达;;中和抗体
基金资助：甘肃省技术创新引导计划-东西协作专题项目（23CXNA0016）;; 人才引进科研启动基金项目（GAU-KYQD-2018-16）
