来源：期刊VIP网 时间：
作者：陈莉;张旭亮;刘彪;吴伟;马畅;赵迎峰;
单位：中国人民解放军东部战区总医院医疗保障中心实验动物室;南京农业大学农业农村部动物生理生化重点实验室;中国人民解放军东部战区总医院第三派驻门诊部;
摘要：制备小鼠细小病毒（MVM）VP2蛋白单克隆抗体，建立一种基于双抗体夹心ELISA的实验动物小鼠MVM抗原检测方法。应用原核表达质粒表达VP2蛋白，纯化蛋白免疫雌性BALB/c小鼠制备单克隆抗体，以获得的单抗1C5作为捕获抗体，HRP标记的单抗8B9作为检测抗体，优化条件建立双抗体夹心ELISA检测方法，并对其灵敏性、特异性和重复性进行系统评价并与qPCR检测进行比对分析。结果显示，表达纯化了MVM VP2蛋白，免疫雌性BALB/c小鼠，免疫程序结束后筛选获得2株单克隆抗体，命名为1C5和8B9,Western-blot和间接免疫荧光鉴定发现这2株抗体可与MVM病毒和重组蛋白特异性结合。以1C5作为捕获抗体，HRP标记的8B9作为检测抗体建立了双抗体夹心ELISA方法，其对MVM病毒和重组蛋白最低检测限分别为10~(3.4)TCID_(50)/m L和50 ng/m L；与4种常见病毒感染的小鼠血清均无交叉反应，包被ELISA板条的批间变异系数均小于10%，与qPCR检测结果相比总符合率为100%。结果表明，成功制备了2株MVM单克隆抗体，应用这2株抗体建立的MVM双抗体夹心ELISA方法具有较好的灵敏性和特异性，与qPCR检测法相比一致性较好，为实验动物小鼠的临床诊断、高通量筛查监测提供了有效的检测方法，从而保障实验动物的SPF状态，为生命科学研究提供健康可靠的实验动物。
关键词：小鼠细小病毒;;单克隆抗体;;双抗体夹心ELISA;;抗原检测
基金资助：2023年科技创新项目（2023JCYJZD077,2023JCYJYB127,22JCYYYB16）;; 实验动物专项课题（SYDW-2018-11,SYDW＿KY(2021)10）
