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作者：包燕玲;宋昱庆;户鑫兵;钟匀汝;田占成;苟惠天;关贵全;殷宏;独军政;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃农业大学动物医学院;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：为了建立一种快速准确的牛结节性皮肤病病毒（LSDV） ELISA抗体检测方法，本研究参考GenBank中的LSDV A33R基因序列，设计截去编码跨膜区片段，密码子优化后合成该截短基因并克隆至原核表达质粒pET-28a，构建了重组质粒pET-28a-A33R_(Δ45-67 aa),IPTG诱导表达A33R_(Δ45-67 aa)蛋白，纯化后以其作为诊断抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示，利用大肠杆菌成功表达并纯化获得分子质量为21 k Da的重组A33R_(Δ45-67aa)蛋白，并建立了LSDV间接ELISA抗体检测方法，该方法具有良好的特异性和敏感性。批间和批内重复试验变异系数均低于10%，表明该间接ELISA方法重复性良好，稳定性高。该方法与IDScreen Capripox双抗原夹心ELISA试剂盒检测结果总符合率为97.7%，表明其可用于LSDV的抗体检测，将为LSD的防控提供技术支撑。
关键词：牛结节性皮肤病病毒;;A33R_(Δ45-67aa)蛋白;;截短表达;;间接ELISA
基金资助：国家重点研发计划项目（2024YFD1800100,2021YFD1800500）;; 甘肃省基础研究创新群体项目（22JR5RA024）;; 国家肉牛牦牛产业技术体系专项（CARS-37）;; 中国农业科学院科技创新工程（CAAS-ASTIP-2021-LVRI）
