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作者：陶明阳;魏书宇;刘卓;付佑喜;刘渴欣;刘长全;徐铭;王思琦;王北艳;马金柱;宋佰芬;
单位：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;中国农业大学动物医学院;
摘要：为揭示G蛋白偶联受体35(GPR35)在锰离子调控巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌（S. aureus）过程中的作用，采用RT-qPCR确定GPR35 siRNA对小鼠巨噬细胞RAW264.7的敲降效率；然后通过涂板计数和荧光显微镜技术检测GPR35敲降的巨噬细胞在Mn~(2+)作用下吞噬S. aureus功能，利用Griess法测定细胞上清液中的一氧化氮（NO）浓度，采用鬼笔环肽染色观察细胞骨架形态变化，最后通过Western-blot检测MAPK和PI3K-AKT信号通路关键蛋白磷酸化水平及细胞骨架相关蛋白表达量变化。结果显示，GPR35siRNA-2敲降效率约为50%;GPR35 siRNA-2+S. aureus组与Blank+S. aureus组相比，巨噬细胞吞噬能力明显降低，NO分泌量减少，细胞骨架伪足短小，并且p-P38、p-JNK、p-ERK、RAC1、Arp2/3、RhoB蛋白表达量均显著降低，而p-PI3K与p-AKT蛋白磷酸化水平表达量显著升高。结果表明，在Mn~(2+)作用下，干扰GPR35能够通过降低NO产生，调节MAPK、PI3K-AKT信号通路活化和降低RAC1、Arp2/3、RhoB细胞骨架相关蛋白表达，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用，表明Mn~(2+)通过GPR35调控巨噬细胞的吞噬作用。
关键词：G蛋白偶联受体;;锰离子;;巨噬细胞;;吞噬
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFD1802504）;; 黑龙江省大学生创新创业训练计划项目（202510223020）;; 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目（YJSCX2023-Y64）
