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作者：孔玉方;王慧煜;许晓琳;袁向芬;吴绍强;
单位：中国质量检验检测科学研究院动物检验与检疫研究所;
摘要：针对H5亚型禽流感病毒相对保守的3个区域，分别设计了sgRNA和逆转录重组酶聚合酶恒温快速检测技术（RT-RPA）的特异性扩增引物，建立了基于RPA-CRISPR/Cas12b检测H5亚型禽流感病毒的方法，并对该检测方法的敏感性、特异性、重复性和可行性进行验证。结果显示，重组质粒阳性标准品检测的灵敏度达到了1.0 copies/μL，是荧光RT-PCR灵敏度的10倍；该方法与H7亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核酸均无交叉反应；用该方法检测50份临床模拟样品并与国标推荐的实时荧光RT-PCR进行比较，结果两种检测方法符合率达100%。上述结果表明，本研究建立的H5亚型禽流感病毒RPA-CRISPR/Cas12b检测方法可为口岸基层的快速筛检工作提供技术支撑。
关键词：一管式;;RT-RPA;;CRISPR/Cas12b;;H5亚型禽流感病毒;;检测方法
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFF0614402）
