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作者：汪雅婷;朱灿灿;尹雪儿;姚杰;王琴;
单位：安徽医科大学第二附属医院检验科;中国科学院合肥物质科学研究院;
摘要：环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）与将成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR/Cas12a）技术相结合，建立一种快速、准确、无污染的甲型流感病毒（Influenza A virus,IAV）的单管式检测方法（LAMP-CRISPR/Cas12a），并探讨其在临床诊断中的应用价值。设计并筛选最佳crRNA和LAMP引物，优化反应缓冲液、ssDNA reporter浓度以及CRISPR/Cas12a反应温度，建立单管式LAMP-CRISPR/Cas12a检测体系，并对该方法的灵敏度、特异性和临床实用性进行了评估。LAMP-CRISPR/Cas12a单管一步法可在45min内实现IAV的检测，灵敏度为10拷贝/μL，检测常见呼吸道病原体RSV-A、RSV-B、PIV3、IBV和SARS-CoV-2结果均为阴性，特异性良好；10例临床样本检测结果均与临床诊断结果相符，且LAMP-CRISPR/Cas12a与PCR法均一致。LAMP-CRISPR/Cas12a单管法检测IAV简便、快速、灵敏度高，且特异性强，无须开盖操作，避免了气溶胶污染，有望成为快速检测IAV的新方法。
关键词：环介导等温扩增;成簇的规律间隔的短回文重复序列;甲型流感病毒;体系优化
基金资助：国家自然科学基金资助项目（项目号：82002189）,题目：基于“电荷吸附”原理的病原体核酸快速富集及一体化检测新方法研究; 安徽医科大学校科研基金资助项目（项目号：2021xkj032）,题目：运动激活·BDNF/TrkB·通路机制研究及其联合CA125·对急性心梗后心衰发生的临床预测价值~~
