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作者:杨丽华;韦珏;覃绍敏;许力士;秦树英;陈凤莲;欧阳康;刘金凤;
单位:广西大学动物科学技术学院;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部(广西)东盟跨境动物疫病防控重点实验室;
摘要:为了筛选出具有抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarhea virus, PEDV)的益生菌株,试验通过CCK-8法初步筛选具有抗PEDV的益生菌株,对筛选到的菌株进行鉴定,并对其进行生物学特性研究,再利用CCK-8法评估益生菌不同作用方式(预处理、后处理、同时处理及直接处理)对PEDV感染细胞的抑制效果,筛选出菌株抗PEDV最佳稀释度及作用方式并以最佳稀释度及作用方式处理PEDV,测定半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。结果表明:初步筛选得到4株具有抗PEDV作用的益生菌株,分别为菌株7、A1、MM1和N1-S-4;结合菌种特异性鉴定,4株菌株7、A1、MM1和N1-S-4分别为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株7与菌株A1在pH值为4.0时可以正常生长,耐酸能力强于另外2株;菌株7在3个浓度(0.10%、0.30%和0.50%)胆盐中均可生长,耐胆盐能力强于其他3株;4株菌对Caco-2细胞的黏附能力均较差,其中菌株MM1的黏附率最高,为6.98%;4株菌培养上清液及菌体裂解液的不同稀释度(1/1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64)以4种不同处理方式作用于感染PEDV的Vero细胞时,均表现出对PEDV的抑制作用,并且直接处理方式的抑制效果较好,其中粪肠球菌裂解液在1/4稀释度下的抑制率最高。TCID_(50)试验进一步证实,1/4稀释度的粪肠球菌裂解液直接作用于感染PEDV的Vero细胞可有效降低病毒滴度。说明粪肠球菌可有效抑制PEDV,具有抗PEDV的作用。
关键词:益生菌;;粪肠球菌;;猪流行性腹泻病毒;;种属特异性鉴定;;体外抗病毒作用
基金资助:广西自然科学基金项目(2022GXNSFAA035521);; 广西兽医生物技术重点实验室项目(23-035-32-A-02)