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作者：张明亮;王尧;马圣明;蒋志惠;唐亚杰;于常鸿;马赞扬;史森霖;张闻慧;吴银荣;翁少亭;
单位：安阳工学院生物与食品工程学院;河南攀冉医疗器械有限公司技术研发部;
摘要：为了建立一种敏感、稳定、快速的犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)可视化检测方法，试验以羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue, HNB)为指示剂，基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术，通过优化反应条件(引物组合、内外引物浓度比、HNB终浓度、孵育温度和时间)建立一种CPV可视化LAMP检测方法，对该方法进行特异性、敏感性和重复性检测，并采用该方法对20份疑似CPV感染的临床样本进行检测。结果表明：筛选到的引物组合为CPV3-FIP/BIP(内引物)、CPV3-F3/B3(外引物)、CPV3-FLP/BLP(Loop引物),内外引物浓度比为16∶1,HNB终浓度为0.32 mmol/L,孵育温度为45℃,孵育时间为30 min。用该方法同时检测CPV、犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)、犬冠状病毒(Canine coronavirus, CCV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus, CPIV)核酸，仅CPV呈阳性，CDV、CCV、CPIV均呈阴性；该方法最低检测限为1×10~0 copies/μL,且相同浓度质粒样品3次重复的显色程度基本一致。采用该方法检测20份临床样本，结果均呈阳性，与实时荧光定量PCR方法的符合率为100%。说明本研究建立的方法在45℃条件下扩增30 min即可完成对CPV的可视化检测，具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点，在临床中具有一定的应用潜力。
关键词：犬细小病毒;;核酸检测;;检测方法;;环介导等温扩增技术;;可视化;;羟基萘酚蓝
基金资助：国家自然科学基金项目(32102744);; 安阳市重点研发计划项目(2023C01SF172);; 安阳市工学院博士后科研启动项目(BHJ2021003)
