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作者：庞浇安;俞渊;胡嗣钦;马天如;叶桂源;常明;李敏鹏;潘孟;陈伟棠;
单位：广西中医药大学第一附属医院;防城港市中医医院;
摘要：目的:探讨大黄灵仙方调控IL-2/STAT5信号通路对肝内胆管炎症模型大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:采用随机数字表法将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、胆宁片0.5 g/kg组、大黄灵仙方2.4、4.8 g/kg组，每组10只。造模大鼠在胆总管一次性注射LPS 1.25 mg/kg构建大鼠肝内胆管炎症动物模型。造模成功后各组分别灌胃给予相应浓度药物，正常对照组、模型对照组予等体积生理盐水灌胃，1次/d,连续7 d。HE染色观察肝组织病理变化程度；微板法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)的含量；ELISA法检测血清中白介素-2(IL-2)、IL-6、IL-10、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；Western blot法检测胆管组织中IL-2、STAT5、p-STAT5蛋白表达；RT-qPCR法检测胆管组织中的Il2、Stat5 mRNA的表达；流式细胞术检测外周血和脾脏CD4、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平，计算Th17/Treg比值。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠的肝窦、胆管细胞变性增生，胆小管严重淤血扩张，汇管区周围存在大量炎性细胞浸润，血清中ALT、AST、TBil、DBil、IL-6、IL-17、TNF-α活力或含量明显升高，胆管STAT5、p-STAT5蛋白表达上调及Stat5 mRNA表达上调(P<0.01),血清中IL-2、IL-10含量及胆管Il2、Stat5 mRNA表达下调(P<0.01),大鼠外周血和脾脏中CD4、Treg细胞数量减少，Th17细胞数量增加，且Th17/Treg比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较，胆宁片组0.5 g/kg、大黄灵仙方2.4、4.8 g/kg的大鼠肝脏病理损伤程度均有改善，极少见细胞坏死及淤血扩张，血清中ALT、AST、TBil、DBil、IL-6、IL-17、TNF-α活力或含量升高(P<0.05或P<0.01),胆管STAT5、p-STAT5蛋白表达下调，Stat5 mRNA表达下调(P<0.05或P<0.01),Il2、Stat5 mRNA的表达上调，血清中IL-2、IL-10含量升高，大鼠外周血和脾脏中CD4、Treg细胞数量增加，Th17细胞数量减少，且Th17/Treg比值降低(P<0.05或P<0.01),其作用呈剂量依赖关系，以大黄灵仙方4.8 g/kg组效果最佳(P<0.05或P<0.01)。结论:大黄灵仙方可通过抑制IL-2/STAT5信号通路活化，维持肝内胆管炎症模型大鼠Th17/Treg细胞亚群平衡，从而抑制炎症因子的释放，促使胆道恢复至非炎症状态，起到防治肝内胆管结石的作用。
关键词：大黄灵仙方;;胆管细胞炎症;;白介素-2/信号转导及转录激活因子5;;辅助性T细胞17/调节性T细胞
基金资助：国家自然科学基金(编号：82360889);; 广西自然科学基金(编号：2020GXNSFAA238012);; 2024“岐黄工程”高层次人才团队培育项目(编号：202411);; 广西中医药大学第一附属医院院级博士启动基金项目(编号：2020BS004);; 广西中医药大学引进博士科研启动基金项目(编号：2020BS030);; 基于BOPPPS模式下提高中医外科专业研究生规范化培训教育质量的研究(编号：JGY2020106)
