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作者：苑舒文;司建超;陈雪;齐珂;杨胜昌;
单位：河北中医药大学生理学教研室;广州中医药大学基础医学院中西医结合基础研究中心;河北省中医药结合氢医学技术创新中心;
摘要：目的:探讨原花青素B2对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞铁死亡的影响及机制。方法:以HT22细胞为研究对象，分为空白对照组、模型对照组、原花青素B2 100μg/mL组、铁死亡诱导剂组和铁死亡诱导剂+原花青素B2 100μg/mL组；CCK-8和LDH法筛选H_2O_2和原花青素B2的最佳作用浓度；试剂盒检测细胞内Fe~(2+)和总铁水平；ELISA法检测细胞内过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力或含量；透射电子显微镜观察细胞线粒体形态变化；免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)积累水平；流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化；RT-qPCR和Western Blot检测细胞铁死亡标志物及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路的mRNA和蛋白表达变化情况；确证H_2O_2能够诱导铁死亡的同时验证原花青素B2的保护作用，随后进一步探究原花青素B2改善HT22细胞铁死亡的分子机制。结果:与正常对照组相比，模型对照组细胞Fe~(2+)、总铁含量以及核受体辅活化子4(NCOA4)、环氧化酶-2(COX-2)、Nrf2、HO-1的蛋白及mRNA表达明显上调，膜铁转运蛋白l(FPN1)、铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白及mRNA表达明显下调，CAT、SOD、GSH-Px的含量明显降低，MDA含量和ROS的水平升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比，原花青素B2 100μg/mL能够显著改善细胞内铁累积，增加CAT、SOD、GSH-Px的含量，降低MDA含量和ROS的水平，上调FPN1、FTH1、GPX4蛋白及mRNA的表达，下调NCOA4、COX-2蛋白及mRNA的表达，并进一步激活Nrf2、HO-1蛋白及mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);经Fin56干预后，细胞铁死亡程度较H_2O_2组显著增强(P<0.05或P<0.01),原花青素B2处理后上述指标变化可见一定程度的改善(P<0.05或P<0.01)。结论:原花青素B2通过平衡细胞内的铁稳态和氧化应激水平，抑制脂质过氧化损伤，改善H_2O_2诱导的HT22细胞铁死亡，其作用机制可能与其激活Nrf2/HO-1通路有关。
关键词：原花青素B2;;过氧化氢;;小鼠海马神经元细胞;;铁死亡;;氧化应激;;核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1通路
基金资助：国家自然科学基金面上项目(编号：82274617)
