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作者：刘士丹;陈佩佩;付先芸;魏绍斌;王坤;陈敏敏;
单位：成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室;三峡大学国家中医药管理局中药药理三级实验室,三峡大学健康医学院;成都中医药大学附属医院;
摘要：目的 联合肠道菌群组学和代谢组学技术探索桂枝茯苓丸(Guizhi Fuling Pill, GFW)干预子宫腺肌病(adenomyosis, AM)的潜在机制。方法 7周龄雌性ICR小鼠随机分为对照组、模型组和GFW组，采用同种异体垂体移植法造模，3组分别灌胃给药8周后处死。评价小鼠子宫组织病理学变化并检测离体子宫收缩频率和波幅。采用16S rRNA基因测序技术对比GFW干预前后肠道菌群Alpha及Beta多样性变化，筛选差异肠道菌群。采用液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)技术探索GFW干预后肠道代谢产物的变化。对差异菌群及差异代谢物进行相关性分析，寻找GFW调控AM的可能机制，并进行实验验证。结果 HE染色结果证实成功形成AM模型。与模型组相比，给予GFW治疗后体外子宫收缩波幅明显降低(P<0.05),收缩频率呈下降趋势。肠道菌群Alpha多样性显示3组样本间的Observed species指数、Ace指数差异均无统计学意义；Beta多样性结果表明，对照组和模型组样本肠道菌群分布有显著差异，GFW治疗后能一定程度回调AM小鼠的肠道菌群组成。进一步研究表明，AM小鼠肠道中拟杆菌门、拟杆菌属丰度显著下调(P<0.01,P<0.01),厚壁菌门、柔壁菌门相对丰度显著升高(P<0.05,P<0.05)。经GFW干预后，柔壁菌门、支原体属以及肠杆菌属丰度显著降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01),而副拟杆菌属相对丰度显著升高(P<0.05)。代谢组学筛选结果证实AM模型小鼠具有22种与氧化应激、免疫及子宫平滑肌收缩等相关的肠道差异代谢物，如前列腺素D_3、谷氨酸、色氨酸、羟基二十碳四烯酸、粪胆素等。相关性分析显示，部分肠道菌群与代谢物之间存在显著相关性。实验验证结果证实，AM小鼠子宫组织中存在活性氧(reactive oxygen species, ROS)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白介素-17(interleukin 17,IL-17)表达水平的上调，经GFW治疗后ROS及TNF-α的表达水平回调。结论 GFW可改善AM小鼠子宫平滑肌收缩、氧化应激和免疫反应，其作用可能与调控AM小鼠肠道菌群及肠道代谢物有关。其具体调控机制尚待进一步的研究证实。
关键词：子宫腺肌病;桂枝茯苓丸;肠道菌群组学;代谢组学
基金资助：国家自然科学基金面上项目(81973897); 成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室开放基金项目(SZKF202206)
