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作者：帅文娜;郭子强;李佳乐;罗梦;李丽薇;周艳君;姜一峰;童武;童光志;李兆龙;高飞;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;广西大学动物科学技术学院;扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;福建省农业科学院畜牧兽医研究所;上海市兽医生物技术重点实验室;
摘要：本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体，并用猪细小病毒（PPV）和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet，构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着，将原核质粒pET-PPV-NS1转化至感受态E.coli BL21细胞中，经由1 mmol/LIPTG诱导以后，通过SDS-PAGE和Western-blot对NS1表达进行检测，结果表明，NS1基因在感受态细胞中得到了良好的表达。其次，将纯化后获得的NS1蛋白采用多点注射的方式对大白兔进行免疫，制备获得针对重组NS1蛋白的多克隆抗体。然后，将真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag转染HEK 293T细胞；同时PPV感染ST细胞后收取蛋白样品，用上述制备的NS1多克隆抗体进行验证。结果显示，制备的NS1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。
关键词：猪细小病毒;;NS1蛋白;;多克隆抗体;;原核表达
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFD1800800,2021YFD1801401）;; 上海市自然科学基金项目（21ZR1476900）;; 国家自然科学基金项目（32373050,32072861）;; 中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-CSLPDCP-202402）;; 上海市兽医生物技术重点实验室开放基金项目（BD1500010）
