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作者：郭心龙;周勇志;曹杰;王亚楠;张厚双;段德勇;周金林;
单位：湖南农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：绵羊无浆体（Anaplasma ovis）是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体，引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病，对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道，但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨在建立一种针对绵羊无浆体msp4基因的LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法。该检测方法是在恒定温度下进行的，不需要特殊设备仪器，能够产生荧光呈现可视化的结果。通过优化LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的体系以确定各成分最佳浓度比。该检测方法能够检测到绵羊无浆体msp4基因最低质粒DNA拷贝数为3.90 copies/μL，具有较高的敏感性。检测其他无浆体和其他常见羊病原体时呈阴性，表明特异性良好。对临床样本的应用检测，与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明，建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于绵羊无浆体的检测，具有快捷方便的现场诊断和在资源匮乏的情况下应用的优势。
关键词：绵羊无浆体;;msp4基因;;LAMP;;CRISPR
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFE0120100）
