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作者：杨澳飞;刘飞飞;陈慧敏;余祖华;韩新雨;贾东鹭;贾钰航;陈建;魏颖;何雷;马雪连;陈松彪;丁轲;
单位：河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室;洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室;河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室;新疆农业大学;
摘要：本试验旨在建立一种牛细小病毒2型（bovine parvovirus,BPV-2）的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列，设计VP2基因保守区域特异性引物，优化反应体系，初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示，扩增VP2基因片段长度约156 bp，符合目的基因片段大小，经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的最低检测限为3.32×101copies/μL，而常规PCR方法检测限为3.32×103copies/μL，表明本研究方法敏感性较高。用该方法检测牛细小病毒Ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛疱疹病毒I型时结果均为阴性，表明本方法特异性强。重复性试验结果表明，组内和组间重复变异率均小于1%，表明该方法具有良好的重复性。分别采用本研究所建立的方法和文献中发表的方法对80份腹泻牛粪便进行检测比较。结果显示，两种方法的阳性检出率均为11%(9/80)，总符合率达100%。以上结果表明本研究建立基于BPV-2 VP2基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性、重复性，为BPV-2的临床流行病学调查及快速检测提供了新的技术支撑。
关键词：牛细小病毒2型;;VP2基因;;SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR;;建立;;应用
基金资助：河南省科技研发计划联合基金项目（232103810029）;; 河南省自然科学基金项目（232300421263）
