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作者：雷晨莹;陈亚娜;张洁;崔灿;马岩;原霖;田克恭;
单位：河南农业大学动物医学院;北京中科基因技术股份有限公司;普道(北京)标准技术有限公司;国家兽用药品工程技术研究中心;普莱柯生物工程股份有限公司;
摘要：建立一种A、B、J、K亚群禽白血病病毒（ALV）微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法。根据ALV pol基因序列设计特异性引物探针，优化ddPCR方法的反应条件，并评估其敏感性、特异性和重复性。结果显示：引物和探针浓度分别为900和250 nmol/L、退火温度为55℃时ddPCR反应效率最高，该方法检出限和定量限分别为1.999和6.664 copies/μL，通过梯度稀释得到的标准曲线的相关系数为0.994 1，不与常见的禽病毒发生交叉反应，重复性好，ddPCR方法的最低检测限约为1 copies/μL，相同测试条件下，qPCR方法的最低检测限约为100 copies/μL,ELISA方法的检测限约为1×104copies/μL。结果表明：建立的ddPCR方法的灵敏度高于qPCR和ELISA方法，可用于A、B、J、K亚群ALV的临床检测以及定量检测。
关键词：禽白血病病毒;;微滴式数字PCR;;定量检测
基金资助：国家重点研发计划项目（2022YFD1800605）
