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作者：热则古丽·艾科拜尔;张亚平;刘浩然;杨莉;马雪连;姚刚;史慧君;付强;
单位：新疆农业大学动物医学学院;新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室;
摘要：为建立一种基于重组酶介导的扩增技术（RAA)和CRISPR/Cas12a相结合的牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV)可视化检测方法。参考GenBank中BVDV 5’UTR基因设计RAA反应的特异性引物和探针，进一步优化RAA-CRISPR/Cas12a反应条件，通过测定灵敏度、特异性和重复性来评估RAA-CRISPR/Cas12a检测方法 。分别使用PCR和RAA-CRISPR/Cas12a对251份犊牛腹泻样品进行了BVDV阳性检测。结果表明，RAA-CRISPR/Cas12a检测方法检测BVDV的最低检测限为3 copies/μL，检测时间为30 min。在对比不同拷贝数阳性样品进行多批次检验后，批内和批间变异系数皆小于5%。用该方法在检测其他牛常见病原微生物时结果均呈阴性，特异性良好。在临床样本检测中，BVDV的PCR阳性检出率为6.37%；同时使用RAA-CRISPR/Cas12a检测时，阳性检出率为29.48%，阳性检出率为PCR的4.63倍。本研究建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的BVDV可视化快速检测方法，对犊牛腹泻的防控具有重要意义。
关键词：牛病毒性腹泻病毒;;重组酶介导等温核酸扩增技术;;CRISPR/Cas12a;;检测
基金资助：新疆维吾尔自治区杰出青年基金项目（2022D01E15);; 新疆维吾尔自治区“天山英才”青年科技拔尖人才专项（2022TSYCCX0049);; 新疆维吾尔自治区重大科技专项（2023A02007-2）
