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作者：杜梦;廖晗婧;黄镘静;王雅琴;赵宗杰;朱枝祥;李军;
单位：北京中医药大学中药学院;北京中医药大学北京中医药研究院;
摘要：目的 探讨小鼠成纤维细胞(MEF)在炎症条件下的基因表达及其调控机制，为明确MEF细胞在炎症反应中的功能和发现通过调节MEF细胞功能发挥抗炎作用的药物奠定基础。方法 将体外培养的MEF细胞分为脂多糖(LPS)处理组、炎症条件培养基(CM)处理组和溶媒对照组，然后分别利用LPS、 CM和等体积溶媒处理MEF细胞；采用转录组测序分析两种刺激对MEF细胞基因表达谱的影响，实时荧光定量PCR验证CM诱导MEF细胞高表达基因的转录水平，ELISA分析细胞上清液中细胞因子浓度；最后通过Western blot法检测CM对MEF细胞内信号通路活化的调节作用。结果 转录组测序分析显示LPS和CM刺激均能诱导MEF细胞内大量基因的转录，CM相对LPS能够增加急性期蛋白、炎症因子、趋化因子、基质金属蛋白酶(MMP)、前列腺素合成酶及集落刺激因子的mRNA转录，并获得实时荧光定量PCR的验证。ELISA测定显示CM相对LPS显著增加MEF细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、 CC趋化因子配体2(CCL2)和CXC趋化因子配体1(CXCL1)。机制研究显示LPS和CM均能诱导MEF细胞内核因子κB p65(NF-κB p65)、 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、 TANK结合激酶(TBK)的磷酸化，CM相对LPS能增加MEF细胞内信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)的磷酸化。结论 LPS和CM均能诱导MEF细胞内多种炎症相关基因的转录和蛋白分泌，CM能增强LPS诱导的MEF细胞活化，其机制可能与CM特异性增强STAT3信号通路活化有关。
关键词：脂多糖(LPS);;条件培养基;;MEF细胞;;炎症反应;;调控机制
基金资助：国家重点研发计划“中医药现代化研究”重点专项(2022YFC3501602)
