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作者：孔文君;朱月姝;徐正中;郑成坤;陈祥;焦新安;
单位：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室;
摘要：目的 制备抗牛CD4的单克隆抗体，并对其进行基本生物学特性鉴定。方法 通过构建牛CD4基因原核质粒，成功表达并纯化出重组牛CD4(rHis-BoCD4和rGST-BoCD4)。利用杂交瘤技术制备抗牛CD4单克隆抗体，通过ELISA对单克隆抗体亚型和效价进行鉴定和分析，使用间接免疫荧光实验、Western blot法分析其特异性。结果 成功获得了四株稳定分泌BoCD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1H4、6A10、3F9和4G10。亚类鉴定单克隆抗体亚类6A10为IgG2b,其余单克隆抗体均为IgM型。Western blot结果显示，4株牛CD4单克隆抗体均可与体外表达的牛CD4蛋白发生特异性结合。间接免疫荧光实验表明4株单克隆抗体均能够特异性识别天然牛CD4蛋白。流式细胞术检测结果显示，3F9识别牛天然CD4分子的能力最强。结论 成功制备了4株特异性强且能识别天然牛CD4蛋白的单克隆抗体，为后续研究牛CD4分子的功能、牛T淋巴细胞疾病的诊断及治疗方法的建立奠定基础。
关键词：牛CD4;;单克隆抗体;;原核表达
基金资助：国家重点研发计划(2021YFD1800403);; 江苏省农业科技自主创新基金(CX(21)1004);; 高等学校学科创新引智计划(D18007);; 江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)
