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作者:孙彦明;刘凤霞;常婷婷;
单位:山东大学附属山东省公共卫生临床中心结核科;
摘要:目的 探讨miR-582-5p调控双特异性磷酸酶1 (DUSP1)对结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞的影响。方法 将巨噬细胞THP-1细胞分为Control组、 Mtb组、 inhibitor-NC组、 miR-582-5p inhibitor组、 miR-582-5p inhibitor联合si-NC组、 miR-582-5p inhibitor联合si-DUSP1组;实时定量PCR检测细胞miR-582-5p、 DUSP1基因表达;ELISA试剂盒检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-1β水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中DUSP1、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白表达;验证miR-582-5p与DUSP1的靶向关系。结果 与Control组相比,Mtb组巨噬细胞miR-582-5p表达、 IFN-γ、 IL-6、 TNF-α、 IL-1β水平、细菌负荷量、 A_(450)值(24 h、 48 h)、 Bcl2蛋白表达升高,DUSP1 mRNA表达、凋亡率、 c-caspase-3、 BAX和DUSP1蛋白表达降低;与Mtb组和inhibitor-NC组相比,miR-582-5p inhibitor组上述指标被部分逆转;下调DUSP1表达可部分逆转下调miR-582-5p表达对Mtb感染巨噬细胞的抑制作用。结论 抑制miR-582-5p表达可上调DUSP1表达,进而抑制Mtb感染巨噬细胞增殖和炎性反应,促进细胞凋亡。
关键词:miR-582-5p;;DUSP1;;结核分枝杆菌(Mtb);;巨噬细胞;;增殖;;凋亡;;炎性反应
基金资助:山东省中医药科技项目(M-203304)