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作者：李怡;李学智;何昕璐;
单位：重庆医科大学中医药学院;重庆市巴南区中医院;重庆中医药学院;重庆医科大学附属大学城医院中医科;重庆市荣昌区中医院;
摘要：目的：观察温和灸对衰老大鼠胸主动脉和肾脏的抗衰老作用，探讨温和灸通过调节微小核糖核酸34a(miR-34a)/沉默信息调节因子1(sirt1)/肿瘤蛋白53(p53)信号通路对抗血管和肾脏衰老的机制。方法：8月龄雄性SD大鼠，腹腔注射D-半乳糖（300 mg·kg~(-1)·d~(-1)）4周，建立衰老大鼠模型。以8只青年大鼠作为青年对照组，24只造模成功的衰老大鼠随机分为老年对照组、药物组和温和灸组，每组8只。温和灸组大鼠予“关元”及双侧“肾俞”温和灸治疗，每天1次，治疗5 d，休息2 d，连续8周；药物组大鼠予腹腔注射丙酸睾酮注射液（7 mg/kg），每3日1次，连续8周；老年对照组、青年对照组大鼠予腹腔注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液，每3日1次，连续8周。观察各组大鼠治疗前后游泳力竭时间；HE染色法和Masson染色法观察大鼠胸主动脉、肾脏组织形态及其胶原纤维含量的变化；ELISA法检测大鼠血清总睾酮（TT）、游离睾酮（FT）含量；免疫组织化学法检测大鼠胸主动脉及肾脏组织中Klotho蛋白的表达；Western blot法检测大鼠胸主动脉及肾脏组织中sirt1、p53、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平；实时荧光定量PCR法检测大鼠胸主动脉及肾脏组织中sirt1、p53、miR-34a mRNA表达水平。结果：与青年对照组相比，老年对照组大鼠游泳力竭时间缩短（P<0.01），胸主动脉及肾脏组织胶原纤维含量升高（P<0.01），血清TT、FT含量降低（P<0.01），胸主动脉及肾脏组织Klotho阳性表达、sirt1蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.01）,p53蛋白及mRNA、TGF-β1蛋白、miR-34a mRNA表达水平升高（P<0.01）。治疗后，与老年对照组相比，药物组、温和灸组游泳力竭时间延长（P<0.01），胸主动脉及肾脏组织胶原纤维含量降低（P<0.01），血清TT、FT含量升高（P<0.01），胸主动脉及肾脏组织p53蛋白、miR-34a mRNA表达水平降低（P<0.01,P<0.05），胸主动脉TGF-β1蛋白、p53 mRNA表达水平降低（P<0.05,P<0.01），肾脏组织sirt1 mRNA表达水平升高（P<0.01）；温和灸组胸主动脉及肾脏组织Klotho阳性表达、sirt1蛋白及mRNA表达水平上升（P<0.01,P<0.05），肾脏TGF-β1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与药物组相比，温和灸组胸主动脉胶原纤维含量降低（P<0.05），肾脏组织Klotho阳性表达增加（P<0.05），胸主动脉sirt1蛋白表达水平升高（P<0.05），肾脏组织p53蛋白表达降低（P<0.05），胸主动脉p53 mRNA及肾脏miR-34a mRNA表达水平降低（P<0.05）。HE染色结果显示，老年对照组胸主动脉内膜增厚，肾组织内肾小球数量减少；与老年对照组相比，药物组和温和灸组胸主动脉内膜更薄，肾小球结构更完整，肾小囊和肾小管管腔更规则；温和灸组大鼠肾脏组织形态学改善优于药物组。结论：温和灸能够通过调控miR-34a/sirt1/p53信号通路起到对老年大鼠胸主动脉和肾脏的抗衰老作用。
关键词：温和灸;;衰老;;miR-34a/sirt1/p53信号通路
基金资助：重庆市基础科学与前沿技术专项项目(No.cstc2017jcyjAX0213)
