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作者：杨成;陈畅;高冰彦;张百依;郑鲲鹏;余坤;龚玲;
单位：湖北中医药大学药学院;
摘要：目的：克隆茅苍术AlCYP71FS9基因，了解该基因在苍术品质形成的过程中可能发挥的作用。方法：根据转录组测序信息设计引物，采用聚合酶链式反应(PCR)对茅苍术AlCYP71FS9基因进行扩增及克隆，利用在线软件对AlCYP71FS9基因编码蛋白进行生物信息学预测。构建35S启动的PCNG绿色荧光蛋白瞬时表达载体，利用激光共聚焦显微镜对该基因的亚细胞定位进行实测验证。采用实时荧光定量qRT-PCR技术分析该基因在茅苍术不同组织中的相对表达量。结果：茅苍术AlCYP71FS9基因开放阅读框(ORF)的长度为1 491 bp,编码497个氨基酸；相对分子质量为56.77 kDa,等电点为7.16,属于亲水性蛋白，且存在P450酶共识别序列FxxGxRxCxG、PERF结构域以及ExxR结构域，属于细胞色素P450超家族成员；AlCYP71FS9基因编码蛋白定位于细胞的内质网；该基因在茅苍术老根茎中的表达量最高，且与茅苍术的茎、叶和嫩根茎均存在显著性差异(P<0.01)。结论：该研究成功克隆到与茅苍术中萜类化合物合成相关的AlCYP71FS9基因，为今后深入开展AlCYP71FS9基因功能及其对茅苍术品质优劣的影响等研究奠定了必要的基础。
关键词：茅苍术;;AlCYP71FS9基因;;生物信息学分析;;亚细胞定位
基金资助：湖北省自然科学基金项目(2023AFB972);; 中国博士后一般面上基金项目(2022M71223);; 国家自然科学基金项目(32000254)
