来源：期刊VIP网 时间：
作者：解盈盈;刘丽;林永强;刘杰;薛菲;张全芳;汪冰;
单位：山东省食品药品检验研究院/山东省中药标准创新与质量评价工程实验室;山东明仁福瑞达制药股份有限公司;山东农业科学院生物技术中心;
摘要：目的：建立威灵仙及其掺伪品升麻的双重TaqMan探针实时荧光PCR鉴别方法。方法：以psbA-trnH序列为基础，分别设计威灵仙和升麻的特异性引物和探针，通过筛选和优化引物浓度、探针浓度、退火温度等主要条件，建立双重TaqMan探针实时荧光PCR反应体系；同时对该方法的精密度、重复性、特异性、灵敏度、掺伪量检测限等指标进行了专项考察，并对混合样品进行了可行性验证。结果：所建立的方法检测威灵仙的精密度试验平均Ct值为22.070,RSD为1.53%,检测升麻的精密度试验平均Ct值为19.438,RSD为1.44%;威灵仙重复性试验平均Ct值为22.800,RSD为2.30%,升麻重复性试验平均Ct值为19.280,RSD为1.89%;在浓度为0.0288～90 ng/μL的范围内，线性关系良好，威灵仙线性方程为y=-3.7703x+22.233,相关系数为0.9967,升麻的线性方程为y=-3.9525x+21.447,相关系数为0.9988;当二者相互掺入的比例低至1%时，仍可获得典型的荧光扩增曲线。结论：该研究建立的双重TaqMan探针实时荧光PCR方法可有效检出威灵仙和升麻，为威灵仙药材的质量控制提供了专属性更强、灵敏度更高的检测方法。
关键词：威灵仙;;升麻;;psbA-trnH;;双重实时荧光PCR;;TaqMan探针
基金资助：泉城产业领军人才支持计划创新团队项目(MRJT2105);; 国家重点研发计划中医药现代化重点专项(2023YFC3504102)
