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作者：房广庆;冯浩英华;蒋希羽;严玥;全世建;
单位：广州中医药大学中药学院;
摘要：目的：观察加味大黄黄连泻心汤含药血清对miRNA-21介导的Smad7炎症和Nrf2氧化应激通路的调节作用，探讨其改善糖尿病肾病(DKD)肾纤维化的作用机制。方法：选用高糖培养基(30 mmol/L)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)纤维化模型，将小鼠GMCs依次分为空白对照组、模型组、二甲双胍组和加味大黄黄连泻心汤含药血清低、中、高浓度组，观察miRNA-21及其介导的Smad7炎症和Nrf2氧化应激通路相关指标的变化，并探讨加味大黄黄连泻心汤含药血清对其调节作用；利用基因转染技术，对高糖处理的GMCs转染miRNA-21 mimic或miRNA-21 inhibitor,使细胞过表达或抑制表达miRNA-21,在此基础上观察加味大黄黄连泻心汤是否通过调节miRNA-21介导Smad7炎症和Nrf2氧化应激通路改善DKD肾纤维化；免疫荧光染色观察小鼠GMCs中纤维化指标FN、ICAM-1蛋白定位表达；RT-PCR检测FN、ICAM-1、Keap1、Smad3、Nrf2、Smad7 mRNA和miRNA-21表达，Western Blot检测Nrf2、Smad7、FN、ICAM-1、Keap1、p-Smad3蛋白表达。结果：与空白对照组比较，模型组细胞FN、ICAM-1蛋白定位表达升高，Nrf2、Smad7 mRNA和蛋白表达降低，FN、ICAM-1、Keap1 mRNA和蛋白表达升高，Smad3 mRNA和p-Smad3蛋白表达升高。与模型组比较，二甲双胍组、加味大黄黄连泻心汤含药血清各浓度组FN、ICAM-1蛋白定位表达降低；二甲双胍组、加味大黄黄连泻心汤含药血清各浓度组、miRNA-21 inhibitor组细胞Nrf2、Smad7 mRNA和蛋白表达升高，FN、ICAM-1、Keap1 mRNA和蛋白表达降低，Smad3 mRNA和p-Smad3蛋白表达降低；miRNA-21 mimic组细胞Nrf2、Smad7 mRNA和蛋白表达降低，FN、ICAM-1、Keap1 mRNA和蛋白表达升高，Smad3 mRNA和p-Smad3蛋白表达升高。与miRNA-21 mimic组比较，miRNA-21 mimic+加味大黄黄连泻心汤含药血清高浓度组细胞Nrf2、Smad7 mRNA和蛋白表达升高，FN、ICAM-1、Keap1 mRNA和蛋白表达降低，Smad3 mRNA和p-Smad3蛋白表达降低。结论：miRNA-21是加味大黄黄连泻心汤防治DKD的靶点之一，加味大黄黄连泻心汤通过调节miRNA-21介导的Smad7炎症和Nrf2氧化应激通路改善DKD肾纤维化。
关键词：加味大黄黄连泻心汤;;糖尿病肾病;;miRNA-21;;纤维化
基金资助：广东省基础与应用基础研究基金项目(2023A151501084)
