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作者：吴珍花;徐超;王佳祺;卢小玲;夏国华;杨春宾;杨欢;
单位：南京市高淳人民医院/江苏大学附属高淳医院;江苏大学药学院;南京中医药大学镇江附属医院;
摘要：目的：建立特异性PCR方法，解决中成药大黄■虫丸中水蛭成分物种真实性的鉴定问题。方法：根据宽体金线蛭(WP)、菲牛蛭(PM)、日本医蛭(HN)、光润金线蛭(WL)的线粒体全基因序列差异设计引物；采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、酚仿抽提法提取与纯化总DNA,以此为模板建立聚合酶链反应(PCR)并进行了反应条件的筛选和优化，同时考察该方法的特异性和灵敏度，并对市售大黄■虫丸中的水蛭成分进行了实测。结果：设计所得4对特异性引物PWP、PHN、PPM及PWL,分别在63、154、155、197 bp处扩增出清晰的目标条带，且未观察到有非特异性条带的干扰；4对特异性引物的检测限均为1.0 ng/μL;可行性验证结果表明，10批市售大黄■虫丸中有3批仅检出宽体金线蛭DNA,被鉴定为合格产品；其余7批则未检测出目标条带。结论：该研究所建立的检测方法具有良好的特异性和灵敏度，可用于鉴定经典名方大黄■虫丸中应含的水蛭成分，为含水蛭成方制剂的市场监管和基原追溯等工作提供了新的检测手段。
关键词：大黄■虫丸;;水蛭;;特异性引物;;PCR扩增
基金资助：国家自然科学基金项目(82173937);; 镇江市科技计划项目(SH2023014);; 江苏大学大学生创新创业训练计划项目(202410299966X)
