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作者：杨建树;王雪峰;穆婧雯;穆滨;
单位：辽宁中医药大学第一临床学院;辽宁中医药大学附属医院儿科;哈尔滨市康隆药业有限责任公司;
摘要：目的：探讨小儿咳喘灵口服液通过增强SIRT1介导的线粒体自噬干预呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺上皮细胞(A549)的作用机制。方法：制备小儿咳喘灵口服液含药血清，CCK-8法筛选含药血清浓度，测定RSV病毒半数感染剂量(TCID_(50)),复制RSV感染A549细胞模型，设空白对照组、模型组、EX527(SIRT1抑制剂)组、小儿咳喘灵口服液含药血清组、小儿咳喘灵口服液含药血清+EX527组。qRT-PCR检测RSV M基因表达；DCFH-DA探针装载检测细胞ROS水平；MitoSOX染色检测线粒体活性氧(MitoROS)水平；JC-1染色检测线粒体膜电位(MPP);Western Blot检测SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM、MFN2、OPA1、DRP1、FIS1、BNIP3、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达。结果：小儿咳喘灵口服液含药血清浓度为15%时RSV病毒半数感染剂量为1×10~(-2.67)/mL。与空白对照组比较，模型组细胞RSV M基因表达、ROS、MitoROS水平显著升高，MMP水平和SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM、MFN2、OPA1、BNIP3、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著降低，DRP1、FIS1蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较，小儿咳喘灵口服液含药血清组细胞RSV M基因表达、ROS、MitoROS水平显著降低，MMP水平和SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM、MFN2、OPA1、BNIP3、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著升高，DRP1、FIS1蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。EX527可逆转小儿咳喘灵口服液上述作用(P<0.05或P<0.01)。结论：小儿咳喘灵口服液能调节SIRT1介导的线粒体功能障碍，增强线粒体自噬，改善RSV感染引起的肺上皮细胞损伤。
关键词：小儿咳喘灵口服液;;呼吸道合胞病毒;;线粒体自噬;;沉默信息转录调节因1
基金资助：国家自然科学基金面上项目(81973906,82374521);; 基于重点研究室研究领域的中医药多学科研究能力提升项目(2022-304);; 2022年中央引导地方科技发展专项(ZY2022B-HRB-04)
