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作者：余梁;唐良华;邓淋城;杨彦君;李义;袁兴霜;谢正兴;
单位：贵州中医药大学;贵州中医药大学第二附属医院关节骨科;
摘要：目的：研究苗药关节和络饮含药血清对AMPK/mTOR/ULK1信号通路的调控作用及对退变软骨细胞自噬、凋亡、炎症及氧化应激反应的影响。方法：制备关节和络饮含药血清；通过CCK-8法检测不同浓度含药血清对退变软骨细胞增殖活力的影响；将软骨细胞分为空白血清组、模型组、关节和络饮含药血清组、关节和络饮含药血清+Compound C(AMPK抑制剂)组。显微镜下观察软骨细胞的形态变化；流式细胞术检测软骨细胞凋亡率；试剂盒检测细胞内ROS、MDA、GSH水平；酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6、TNF-α水平；实时荧光定量PCR法检测AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达；Western Blot检测各组软骨细胞p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、Bax、Bcl-2、Beclin-1、ATG5、MMP13蛋白表达。结果：与模型组比较，5%、10%、15%关节和络饮含药血清组软骨细胞增殖活力显著升高(P<0.05),10%含药血清作用最佳，选择10%浓度含药血清进行后续实验。与模型组比较，关节和络饮含药血清组软骨细胞形态明显改善，细胞凋亡率和ROS、MDA、IL-6、TNF-α水平显著降低，GSH水平显著升高，mTOR mRNA和p-mTOR、Bax、MMP13蛋白表达显著降低，AMPK、ULK1 mRNA和p-AMPK、p-ULK1、Bcl-2、Beclin-1、ATG5蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论：苗药关节和络饮通过激活AMPK/mTOR/ULK信号通路促进软骨细胞自噬，延缓细胞凋亡进程，减轻退变软骨细胞炎症反应、氧化应激反应和基质降解。
关键词：苗药关节和络饮;;AMPK/mTOR/ULK1信号通路;;软骨细胞;;自噬;;凋亡;;氧化应激反应
基金资助：贵州中医药大学骨伤学院学科建设资助项目(骨伤学科资助2024号)
