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作者：李冰潇;刘晓东;周传凤;刘元元;秦志华;李卫真;
单位：云南农业大学动物医学院;青岛农业大学动物医学院;青岛农业大学生命科学学院;青岛蔚蓝生物股份有限公司;
摘要：为了构建抗菌肽(AMPs)LL-37的高效表达体系、优化制备工艺并系统评估其抗菌特性和生物安全性，本试验通过基因重组技术构建pET-32a-LL-37大肠杆菌表达体系，优化诱导表达条件[温度、时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度]，纯化的重组LL-37经鉴定后，测定其对7种临床常见细菌的最小抑菌浓度(MIC)和抗菌率；采用连续传代试验，测定重组LL-37和抗生素对细菌传代前后的MIC值；采用细胞毒性试验测定重组LL-37的细胞毒性。结果显示，成功构建了重组pET-32a-LL-37大肠杆菌表达体系，最佳诱导温度为37℃、诱导时间为16 h、IPTG终浓度为0.6 mmol/L；重组LL-37对肠炎沙门菌的抗菌活性最强，MIC值为8μg/mL，其次是金黄色葡萄球菌(MIC值为16μg/mL)、肺炎克雷伯菌(MIC值为32μg/mL)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MIC值为64μg/mL)、铜绿假单胞菌(MIC值为64μg/mL)，对鲍曼不动杆菌和粪肠球菌的抗菌活性相对较差，MIC值分别为128和256μg/mL；多种细菌在长期亚抑菌浓度重组LL-37暴露下，肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的耐药性增强，重组LL-37对两者的MIC值分别从32和64μg/mL增至64和128μg/mL，其余5种细菌未产生耐药性；重组LL-37在有效抗菌浓度下对人胚胎肾上皮293T细胞(HEK293T)和小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)无细胞毒性。综上所述，本试验所获得的重组LL-37对部分临床常见细菌具有高效抗菌活性，且耐药性风险可控，在安全浓度范围内具备局部应用潜力，为AMPs的规模化生产和抗耐药菌治疗策略的开发提供了参考依据。
关键词：抗菌肽;;重组LL-37;;抗菌活性;;耐药性演化
基金资助：山东省“外专双百计划”团队项目（WST2019013）;; 山东省家禽产业技术体系（SDAIT-11-14）
