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作者：刘筱筱;余秋蓉;李霞;毛立;许信刚;李彬;
单位：西北农林科技大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所国家兽用生物制品工程技术中心农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室;
摘要：不断发现的新型冠状病毒对人类的危害极其严重，牛冠状病毒（bovine coronavirus,BCoV）具有致人畜共患病的潜力，而BCoV分离鉴定及病原检测均缺乏有效的方法。本研究制备与BCoV发生特异性反应的家兔多克隆抗体，为BCoV的检测和鉴定奠定技术基础。本研究将BCoV灭活后免疫家兔制备针对病毒的多克隆抗体。经3次免疫后检测血清中和效价，将纯化后的多克隆抗体用于间接免疫荧光（IFA）、免疫印迹（Western-blot ）和夹心ELISA试验。结果显示，制备的家兔多克隆抗体与BCoV反应，血清中和效价可达到1∶2~8，与羊冠状病毒（cpCoV）反应，可达1∶2~9。经IFA鉴定，该多克隆抗体能够与不同毒株的BCoV和cpCoV发生特异性反应；Western-blot分析发现在约50 k Da处出现特异性条带；将家兔多克隆抗体作为夹心ELISA的包被抗体，只与BCoV和cpCoV发生特异性反应，而不与其他病毒发生交叉反应。该多克隆抗体与不同毒株的BCoV和cpCoV特异性结合，可用于分离鉴定BCoV和cpCoV的IFA和Western-blot分析，制备的多克隆抗体还可作为包被抗体用于检测BCoV与cpCoV的双抗夹心ELISA。本研究为BCoV与cpCoV的病原检测与流行病学调查奠定了基础。
关键词：牛冠状病毒;;多克隆抗体;;双抗体夹心ELISA;;鉴定
基金资助：国家重点研发计划项目（2023YFD1801302）;; 江苏省重点研发计划项目（BE2022330）;; 兽医生物技术国家重点实验室开放基金项目（SKLVBF202106）
