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作者：刘学春;户鑫兵;宋昱庆;孟凡华;田占成;关贵全;殷宏;独军政;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州大学;
摘要：参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏好性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质粒pET-sumo-VP5Δ79aa。将该重组质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG分别在37℃和16℃条件下进行诱导表达和可溶性分析，经SDS-PAGE检测，重组VP5Δ79aa蛋白主要以包涵体形式表达。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组VP5Δ79aa蛋白，得到与预期大小相符的单一目的条带。纯化后的重组VP5Δ79aa蛋白经不同浓度梯度的尿素透析复性后，将其免疫雌性BALB/c小鼠（6～8周龄），取免疫后脾细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接ELISA、免疫荧光和Western-blot分析，筛选得到2株反应性和特异性良好的单克隆抗体4A10和5H11，其不仅能与重组VP5Δ79aa截短蛋白以及重组全长VP5蛋白反应，而且能特异识别BTV-1感染细胞中的天然VP5蛋白，这为深入研究BTV VP5蛋白的生物学功能及其抗原表位鉴定奠定了基础。
关键词：蓝舌病毒;;VP5蛋白;;截短表达;;单克隆抗体
基金资助：国家重点研发计划项目（2021YFD1800500,2024YFD1800100）;; 甘肃省基础研究创新群体项目（22JR5RA024）;; 甘肃省科技厅项目（22CX8NA011）;; 国家肉牛牦牛产业技术体系专项（CARS-37）;; 中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-2021-LVRI）
