来源：期刊VIP网 时间：
作者：李文卉;岳龙;曲自刚;张念章;李立;闫鸿斌;贾万忠;殷宏;付宝权;次旦欧珠;米平;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;武汉市动物疫病预防控制中心;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;西藏自治区日喀则动物疫病预防控制中心;
摘要：为了挖掘多头带绦虫功能性新基因，分别以多头带绦虫基因组DNA和cDNA为模板，依据多头带绦虫基因组数据设计引物，利用PCR扩增具有FNⅢ结构域的基因序列，利用生物信息学软件对该基因进行序列分析。分别将扩增的基因片段连接至原核表达载体pGEX4T-1进行原核表达，利用Western-blot分析该重组蛋白的抗原性，验证其细胞黏附活性及进行组织定位，并开展了绵羊免疫攻虫试验。结果表明，成功克隆了4个分别命名为TmAdh1～TmAdh4长度约为1 800 bp的序列，均由3个外显子和2个内含子组成；序列分析发现4个基因含有N端信号肽和1个FNⅢ结构域，基因进化分析发现TmAdh1～TmAdh4蛋白属于带科绦虫抗原性蛋白家族的一个新的亚类。分别构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21感受态细胞，成功表达了约39.0、38.1、38.9和37.8 k Da的重组蛋白。Western-blot结果表明rTmAdh3蛋白能被脑多头蚴病绵羊血清识别。细胞黏附活性试验表明rTmAdh1～r TmAdh4对CHO和NRK细胞都具有黏附活性。免疫组化结果表明，TmAdh1～TmAdh4主要分布于原头节的顶突。重组蛋白免疫绵羊保护性试验结果显示，rTmAdh1、rTm Adh3和rTmAdh4免疫绵羊后抗体水平上升，三免后达到峰值，攻虫后抗体水平逐渐下降。用多头带绦虫虫卵感染绵羊后，rTmAdh1、rTmAdh3、rTmAdh4免疫组绵羊的脑包囊数较对照组分别减少61.71%、53.17%、50.76%。本研究为多头带绦虫新基因功能性研究奠定了基础。
关键词：多头带绦虫;;纤连蛋白三型(FNⅢ)结构域;;黏附活性;;组织定位;;免疫保护
基金资助：西藏自治区科技计划项目（QYXTZX-RKZ2024-03-3）;; 国家自然科学基金项目（31702228）;; 中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-2021-LVRI）
