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作者：周婷婷;杨帆;杨洋;齐晓兰;邵文华;黄梦瑶;董星艳;陈治彤;刘泓屹;蔡建涛;曹伟军;蒲秀瑛;张伟;郑海学;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;兰州理工大学生命科学与工程学院;
摘要：为探究JMJD6(jumonji domain-containing protein 6)基因对口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）复制的影响，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术设计并构建JMJD6基因功能缺失细胞系，并在该细胞进行FMDV感染试验，全面分析JMJD6基因在FMDV增殖中的作用。在本研究中，构建2条靶向猪JMJD6基因的单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)，在T4连接酶的作用下分别与pX459载体连接，将重组质粒转染PK-15猪肾细胞系；以嘌呤霉素为筛选工具，对JMJD6基因敲除细胞实施筛选，采用有限稀释法获得单克隆细胞株；并对单克隆细胞株进行DNA测序与Western-blot验证JMJD6基因敲除效果。FMDV感染试验结果表明，该细胞系与PK-WT细胞相比，PK-JMJD6-KO在FMDV的蛋白水平、基因水平和病毒滴度方面有显著抑制作用。综上所述，本研究运用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建JMJD6基因功能缺失的PK-15细胞系，并证实JMJD6基因在FMDV增殖中的重要作用，为后续进一步研究JMJD6基因促进FMDV增殖的调控机制奠定了基础。
关键词：口蹄疫病毒;;JMJD6基因;;CRISPR/Cas9;;PK-15细胞
基金资助：国家自然科学基金项目（32473064）;; 国家重点研发计划项目（2021YFD1800302）;; 兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金（lzujbky-2022-ey20）;; 国家生猪产业技术体系项目（CARS-35）;; 国家生猪技术创新中心项目（NC-TIP-XD/C03）;; 甘肃省自然科学基金项目（23JRRA547）
